蛋白質(zhì)是由不同的Α-氨基酸按一定的順序通過(guò)酰胺鍵(蛋白質(zhì)化學(xué)中專(zhuān)稱(chēng)肽鍵)縮合而成的,具有較穩(wěn)定的構(gòu)象并具有一定生物功能的生物大分子。其生物功能主要表現(xiàn)在:生命活動(dòng)所需要的許多小分子物質(zhì)和離子,是由蛋白質(zhì)來(lái)運(yùn)輸?shù)?生物的運(yùn)動(dòng)離不開(kāi)蛋白質(zhì);生物體的防御系統(tǒng),用以防御致病微生物或病毒侵害而產(chǎn)生的抗體,也是一類(lèi)高度專(zhuān)一的蛋白質(zhì),起到保護(hù)機(jī)體的作用，蛋白質(zhì)含量的測(cè)定可以使用凱氏定氮儀進(jìn)行快速的測(cè)定分析。
勞里改良法(BCA法):又稱(chēng)二喹啉甲酸(BCA)檢測(cè)法。這是近年來(lái)研制的一種改進(jìn)Low ry法,反應(yīng)簡(jiǎn)單而且?guī)缀鯖](méi)有干擾物質(zhì)的影響。這種方法的原理[1]是在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)分子中的肽鍵結(jié)構(gòu)能與Cu2+絡(luò)合生成絡(luò)合物,同時(shí)將Cu2+還原成Cu+。而B(niǎo)CA試劑可敏感特異地與Cu+結(jié)合,形成穩(wěn)定的有顏色的復(fù)合物,在562nm處有高的吸收值。顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比,可根據(jù)吸收值的大小來(lái)計(jì)算蛋白質(zhì)的含量。此法的優(yōu)點(diǎn)是試劑單一,終產(chǎn)物穩(wěn)定,與Low ry法相比幾乎沒(méi)有干擾物質(zhì)的影響。但是該方法的反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng),蛋白質(zhì)也會(huì)發(fā)生不可逆的變性，而定氮儀則是一種比較經(jīng)典的測(cè)定方法，該方法在我國(guó)廣泛的推廣運(yùn)用。Krystal發(fā)展了銀染色法測(cè)定微量蛋白質(zhì)的方法,蛋白質(zhì)樣品先用甘油醛處理,之后與銀氨溶液混合, 10分鐘后,加入硫代硫酸鈉終止反應(yīng),測(cè)定420nm的吸光度。該法的先行范圍為15- 2000ng,比Bradford法靈敏10倍。蛋白質(zhì)銀復(fù)合物形成快,顯色穩(wěn)定,碳水化合物,非離子表面活性劑幾乎不干擾測(cè)定。BORA TYN SKY加入雙硫腙,A gCL與雙硫腙形成的不溶絡(luò)合物因蛋白質(zhì)的存在而穩(wěn)定,在555nm測(cè)定吸光度。膠體金屬,如金、銀、鈀也與蛋白質(zhì)作用,已被用于測(cè)定微量蛋白質(zhì)。膠體金的測(cè)定波長(zhǎng)為590nm,可以測(cè)定20ng的蛋白質(zhì);膠體鈀可測(cè)定100ng的牛血清蛋白,而強(qiáng)堿高濃度的鹽以及SDS有干擾,并且不同的蛋白質(zhì)的信號(hào)有差別。
凱氏定氮儀：http://www.dsddy.cn/